更新时间:2021-09-02
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血清标本宜在新鲜时检测
◆ 如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。
◆ 如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。
◆ 一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。
◆ 混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。
◆ 反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。
◆ 保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。
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注意事项:
◆ 标本宜在新鲜时检测,如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
◆ 冻结标本溶解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混合,不要在混匀器上强烈震荡。
◆ 浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤,澄清后再检测。
◆ 反复冻融会使蛋白效价降低,所以代测样本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。
◆ ELISA实验标准曲线平直,一般有以下原因:标准曲线制备是否不当,洗孔不净,吸孔不充分,读数不准确或是吸量误差。查找原因,即可找到相应解决方案。
实验的基本操作流程:
A 包被ELISA板子或使用商品化ELISA板
B 让标本中的抗原/抗体与固相载体上的抗体/抗原结合,形成固相复合物。
C 根据颜色反应的程度进行抗原/抗体的定性或定量。
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