人分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)ELISA试剂盒

人分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)ELISA试剂盒
简介
分泌型卷曲相关蛋白 1，也被称为 SFRP1，是由 SFRP1 基因编码的蛋白质。 它是 SFRP 家族的成员，该家族包含一个富含的结构域，与卷曲蛋 白的推定 Wnt 结合位点同源。SFRP 充当 Wnt 信号传导的可溶性调节剂。 它和 SFRP5 可能参与确定视网膜感光细胞的极性。它在几种人体组织中表 达，在心脏中水平最高。分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)家族由人体中的五种分 泌型糖蛋白(SFRP1、SFRP2、SFRP3、SFRP4、SFRP5)组成，它们充当细胞 外信号配体。每个 SFRP 的长度约为 300 个氨基酸，并包含一个富含结构域(CRD)，与卷曲(Fz)受体的 CRD 具有 30-50%的序列同源性。SFRP 能够结合细胞外区室中的 Wnt 蛋白和 Fz 受体。SFRP 和 Wnt 蛋白之间的相 互作用阻止后者结合 Fz 受体。SFRP 还能够通过与卷曲受体形成抑制复合物 来下调 Wnt 信号传导。Wnt 通路在胚胎发育、细胞分化和细胞增殖中起关 键作用。已经表明，这种关键发育途径的失调发生在几种人类肿瘤实体中。 它是 SFRP 家族的 35kDa 原型成员。它作为 Wnt 信号传导的双相调节剂， 在高浓度时抵消 Wnt 诱导的效应，并在低浓度时促进它们。它位于在乳腺癌 中经常缺失的染色体区域(8p12-p11.1)，被认为含有肿瘤抑制基因。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术 : 将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物SFRP1，清洗后，再加入标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体"免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本SFRP1的浓度。
需要的其他材料
1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
样品保存
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配置
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先从2μg/mL标准品（200μL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至100ng/mL（例：50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液，制备得到1000μL的100ng/mL浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将100ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为:  100ng/mL、 50ng/mL、 25ng/mL、12.5ng/mL、 6.25ng/mL、 3.125ng/mL、 1.563ng/mL，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。

抗体工作液配置
使用十分钟前，将100×检测化抗体于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×检测化抗体稀释成1×检测化抗体工作液，根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置
使用十分钟前，将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液，根据所需用量配置。

备 注：如待测样本SFRP1浓度高于标准品高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数。

人分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)ELISA试剂盒
结果的计算    

计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。示例数据以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。

重复性
板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。

灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.78ng/mL。
特异性

该试剂盒测定可识别重组人SFRP1。

其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。

人分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)试剂盒仅供科研使用，用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中的人SFRP1。