实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。

羊elisa检测试剂盒操作步骤：

1、使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差；

2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内；

3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时；

4、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次；

5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟；

6、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次；

7、每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照；

8、取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果；

9、在450nm波长处测定各孔的OD值。

羊elisa检测试剂盒液体类标本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2、血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3、尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并  放出细胞内成份。离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

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