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上海通蔚生物|ELISAELISA检测的正确性和准确性
更新时间:2024-05-27   点击次数:202次

简单介绍在ELISA实验中对不同类型样本的处理方法ELISA实验中正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的第一步。

1、血浆

ELISA实验用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融,避免使用溶血或高血脂的标本。

2、 细胞培养上清

 取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质取上清。(-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。)

3、 细胞裂解液

 (1)吸去培养板内的培养基,用yi酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。(悬浮细胞可省略)

 (2)收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。

 (3)加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL      PBS重悬。

 (4)将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。

 (5)4℃10000×g离心10min,除去细胞碎片取上清。(-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。)

 4、 血清

血清是常用于ELISA检测的一类样本,处理比较简单。用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃一晚上,使血清析出。(将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清大程度的析出)。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。


小结: ELISA只能检测可溶性蛋白的含量,故应保证所有样本均为澄清的液体,沉淀或悬浮物都应离心去除。为保证检测的准确性,保存于-20℃或-80℃的样本尽量在1~6个月内进行检测;4℃保存的样本应在1周内进行检测。(保证样本不含NaN3,NaN3会抑制HRP的活性,从而导致假阴性的结果。)

上海通蔚生物科技有限公司

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