上海通蔚生物为了更好地助力科研实验，ELISA实验原理简单，想要得到可靠的实验结果，却并不那么容易。步骤少，流程短，试剂盒操作相对简便，实验小白也能轻松上手。然而，实验上手虽快，在这里将大家关心的ELISA试剂盒实验的常见问题整理如下：

一、关于试剂盒：

1. 你们的ELISA试剂盒能检测什么物种？

目前我们的试剂盒检测的种属主要为人、小鼠、大鼠、猴、兔、猪、鸡、植物等，种属齐全。如果试剂盒的命名带有特定指向（如人），代表专门针对此物种；没有指明物种，则代表该试剂盒在目前公司产品涉及的种属（例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等）内通用；其他特殊种属的检测适用性，请联系技术支持确认。

2. 96TELISA试剂盒能检测多少样本？是否需要做复孔？

为了保证实验结果的准确性，我们建议标准品和样品都做复孔，但并不强行要求ELISA实验一定要做复孔/3复孔，客户可根据自己的需求设定复孔实验，具体实验情况可咨询恒远生物技术指导。

3. 需检测的样品较多，能否减少标曲的孔数？

为保证结果的准确度，不建议减少标曲的孔数，请确保能够检测至少6个不同的标准品浓度（含空白孔)。

4. ELISA试剂盒要使用多次，但样本较多，是否可以只做一次标曲？

虽然ELISA实验的操作步骤相同，但每次实验的各种影响因素都会有所变化。所以，每次实验时，都必须重新绘制标准曲线，以得到更准确可靠的检测结果。如果需要做多次实验，ELISA试剂盒溶解后的高浓度标准品可以分装保存于-20℃条件下，避免反复冻融，半个月内使用有效。

二、关于样本

1. 血清血浆样本应该选用哪种真空采血管收集？

血清：不含抗凝剂的采血管/含促凝剂采血管（通常为红色、、橘色管盖的采血管）

血浆：含抗凝剂的采血管（通常为绿色、紫色管盖的采血管）

样品收集后，若在1周内进行检测，可保存于2-8℃条件下；若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃条件下（1个月内检测）或-80℃条件下（3个月内检测），避免反复冻融。检测前，应缓慢融化冷冻过的样本，并离心除去冻融过程中产生的沉淀物。

2. 采集时，如何尽可能避免溶血现象？

溶血可由多种理化因素和毒素引起。在体外，机械性强力振荡、低温冷冻等诱因均可引起溶血。为避免溶血对检测结果产生影响，应注意：

（1）静脉采血时，回抽压力不宜过大；

（2）一次性采血量不宜过少；

（3）采集的全血不宜激烈振荡；

（4）离心转速不宜过大；

（5）收集的全血需尽快处理成血清/血浆，全血不能冻融；

（6）若需要麻醉采血，需使用没有溶血作用的麻醉剂。

3. 组织/细胞样本收集中提到的“反复冻融"，过程应该如何操作？

（1）组织样本：组织研磨后，将其-80℃放置1h/液氮放置0.5h，再置于30℃水浴锅中轻微振荡，使其迅速融化，反复操作1-2次即可；

（2）细胞样本：按上述操作步骤，反复冻融2-3次。若为膜蛋白，可以适当做超声处理，但需要控制好超声的温度、频率；

4. 怎样判断我的样本是否需要稀释或做其他处理？

试剂盒的检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度，并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果是常规样本类型，可以咨询ELISA技术支持，ELISA试剂盒以获取样本的推荐稀释倍数，并安排预实验检测；如果样品中待测物的浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩；如果样本中的分析物浓度远低于试剂盒的检测限，建议选择灵敏度更高的试剂盒来检测。

更多实验问题可咨询我司业务员，为您提供专业的技术指导。