本试剂仅供研究使用 标本:血清或血浆
试验原理:
VEGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知VEGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将VEGF和生物素标记的抗体同时温育。人血管内皮生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中VEGF的浓度呈比例关系。
自备材料
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
人血管内皮生长因子ELISA 检测试剂盒安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
1. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的VEGF标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的VEGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:0-40ng/ml
4、敏感度: 0.1 ng/ml
人血管内皮生长因子ELISA 检测试剂盒beta-Amyloid(35-42) β淀粉样肽/Aβ42抗体 X47455 0.1ml
ER α 雌激素受体α抗体 X47456 0.1ml
CKLFSF2/CMTM2 趋化素样因子超家族成员2抗体 X47457 0.2ml
COX7A2 细胞色素c氧化酶VIIA亚型2抗体 X47458 0.1ml
CKLFSF2 isoform 1 趋化素样因子超家族成员2亚型1抗体 X47459 0.2ml
MAP65/ASE 1 拟南芥MAP65蛋白抗体 X47460 0.2ml
Streptavidin/SA protein 链酶亲和素抗体 X47461 0.1ml
human Serum IgA 人血清型免疫球蛋白A抗体 X47462 0.2ml
ETFA 电子转移黄素蛋白α抗体 X47463 0.2ml
γ-taxilin/LSR5 脂多糖相关反应蛋白5抗体 X47464 0.2ml
T4/L-Thyroxine 甲状腺素T4抗体 X47465 0.2ml
HLA G(N-Terminus) 人类白细胞抗原G抗体(N端) X47466 0.1ml
HLA G(C-terminal) 人类白细胞抗原G抗体(C端) X47467 0.1ml
hemagglutinin protein/H 麻疹病毒血凝素抗体 X47468 0.2ml
WIG-1/PAG608 野生型P53诱导基因1抗体 X47469 0.1ml
CD71/TFR/Transferrin receptor 转铁蛋白受体抗体 X47470 0.1ml
GAPDH(3E12)-Loading Control 3-磷酸醛脱氢酶单克隆抗体(内参抗体) X47471 0.1ml
GAPDH 3-磷酸醛脱氢酶抗体(内参抗体) X47472 0.1ml
beta-Actin (Loading Control) β-肌动蛋白抗体(内参抗体) X47473 0.1ml
14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon) 14-3-3蛋白抗体 X47474 0.1ml
phospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58) 磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗体 X47475 0.1ml