操作步骤

1、将1个McAb与固相载体连接，形成固相McAb。人ELISA试剂盒洗涤除去未结合物。

2、同时加入待检标本和酶标McAb，温育，是待检抗原和固相McAb及酶标McAb反应形成双抗体夹心复合物。洗涤除去未结合物。

3、加底物显色。

适用于双抗体夹心法的人ELISA试剂盒，有些也可用双位点一步法检测。如HBsAg同样可用此法进行检测，其原理为：将纯化的抗HBs吸附于固相载体表面，加入待检血清(或血浆)，同时加入辣根过氧化物酶标记的另一个抗HBs(酶结合物)，如血清或血浆中含有HBsAg，则通过温育形成固相McAb-HBsAg-酶标McAb复合物，加入底物，通过显色反应进行测定。若血清或血浆中不含HBsAg，通过洗涤除去未结合物，

加底物后就不显色。

1.吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，吸取的量不够准确。
2.液体全部加入酶标孔后，将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s，使液体充分混合均匀，也使其得到充分的反应。
3.孵育时要使盖板膜封好酶标板，防止水分蒸发，以防曲线不成线性。
4.由于底物显色剂对光及其敏感，因此要避光保存。
5.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
6.吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸，减少误差。
7.检测吸光度前应将酶标仪打开，将其预热30min以上。
8.底物为TMB，避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性，应尽量避免接触皮肤。
9.要确保微量加样器的准确性，可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质，人ELISA试剂盒温度环境为20%左右时，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其zui高量程和zui低量程进行确定。
10.要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。
11.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。