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人ELISA试剂盒的酶标抗体(抗原)
发布时间:2015-05-19   点击次数:441次

    因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时,ELISA试剂盒应注意可测范围的zui高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2,图1-4),人ELISA试剂盒如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。

    假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,人ELISA试剂盒虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物,标记方法颇为简便。生物素与亲和素的结合具有很强的特异性,其亲和力较抗原抗体反应大得多,两者一经结合就极为稳定。

    由于一个亲和素可与4个生物素分子结合,因此如把ABS与人ELISA试剂盒法可分为酶标记亲和素-生物素(LAB)法和桥联亲和素-生物素(ABC)法两种类型。两者均以生物素标记的抗体(或抗原)代替原ELISA系统中。在LAB中,固相生物素先与不标记的亲和素反应,然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期,亲和素从蛋清中提取,这种卵亲和素为碱性糖蛋白,与聚苯乙烯载体的吸附性很强,用于ELISA试剂盒中可使本底增高。从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点,在人ELISA试剂盒应用中有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通人ELISA试剂盒多用了两种试剂,增加了操,在临床检验中ABS-ELISA试剂盒应用不多。

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