人ELISA试剂盒试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，人ELISA试剂盒有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。

 1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

 2 加样 可能原因：

 1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；

 2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；

 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

 解决办法：

 1）标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，人ELISA试剂盒采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。

 2）加样后及时放入孵箱。

 3）加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

 4） 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

 5） 标本较多时，请分批操作。

 3 孵育 可能原因：

 1） 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*；

 2） 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。 

解决办法：

 1） 贴封片或加盖；

 2） 按说明步骤严格控制操作时间。

4 洗板 可能原因：

 1） 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。

 2） 采用半自动洗板机洗板时，人ELISA试剂盒洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板效果差。

 3） 反应板过多造成洗板等待时间长。