每种试剂都有其反应模式，其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高，反应时间长，会造成整板本底高，阳性率高。温育一般用湿盒或水浴，ELISA试剂盒反应板不宜叠放，以保证各板温度都能迅速平衡，为避免蒸发，板上应加盖。
作为记录测定结果的仪器，酶标仪的性能稳定与否，决定结果的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正；其次酶标仪波长设置要正确，使用双波长，一个检测波长，一个参比波长，以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰。此外，ELISA试剂盒在用酶标仪读数时先擦试微孔板底部并压平板条。由于各种酶标仪性能有所不同，使用中应详细阅读说明书
综上所述，尽管目前上以及我国有了部分标准血清或参比血清（血清盘），但是酶联免疫吸附技术目前在技术上尚未做到标准化。受方法学及技术条件的限制，在酶联免疫吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性，ELISA试剂盒我们可以通过以上措施把非特异性显色降至zui低限底，从而提高检测的特异性，并得到更准确、可靠的实验结果。
