1.ELISA试剂盒在酶标包被板上设规范品孔10孔，在、第二孔中别离加规范品100μl，然后在、第二孔中加规范品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100μl别离加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔别离加规范品稀释液50μl，ELISA试剂盒混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl别离加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中别离加规范品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl别离加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中别离加规范品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中别离取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔别离加规范品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度别离为30ng/L，20ng/L ，10ng/L，5ng/L， 2.5ng/L）。
2. 加样：ELISA试剂盒别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其他各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，ELISA试剂盒然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗刷液用蒸馏水20倍稀释后备用。
5. 洗刷：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔参加酶标试剂50μl，空白孔在外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗刷：操作同5。
9. 显色：每孔先参加显色剂A50μl，再参加显色剂B50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 停止：每孔加停止液50μl，停止反应（此时蓝色立转）。
11.ELISA试剂盒测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。