X-gal

 

外观：白色粉末
纯度（HPLC）：>；；=99％
比旋光度：[&；alpha；]20D -62º；； ±；； 2 （c=1 in DMF/H2O 1:1）
水分：&；le； 1％
溶解性：清澈溶液（2％in DMF）
储存：4℃ 避光避潮；长期存放-20℃
储液配制：溶解100mg X -gal 于5 mL DMF中，分装成1ml，用铝箔包装避光保存。
用途：X-Gal是&；beta；-半乳糖苷酶（&；beta；-galactosidase）的显色底物，在&；beta；-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。常用于&；beta；-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。溶于DMSO，溶解度可达20mg/ml。也溶于DMF。
蓝白斑筛选：
1）载体质粒和转化受体菌株：
实验所使用的载体质粒DNA为pBS,转化受体菌为E. coli DH5&；alpha；菌株。E. coli DH5&；alpha；菌株带有&；beta；-半乳糖苷酶C端部分序列的编码信息。载体质粒DNA pBS上带有&；beta；-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和&；beta；-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列。（这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能。）
在各自独立的情况下,pBS和DH5&；alpha；编码的&；beta；-半乳糖苷酶的片段都没有酶活性。但在pBS和DH5&；alpha；融为一体时可形成具有酶活性的蛋白质。
这种lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的&；beta；-半乳糖苷酸阴性突变体之间实现互补的现象叫&；alpha；-互补。
2）实验用显色方法
实验中使用X-gal（5-溴-4氯-3-吲哚-&；beta；-D-半乳糖苷）和IPTG（异丙基硫代-&；beta；-D-半乳糖苷）而非直接使用&；beta；-半乳糖。X-gal 以及 &；beta；-半乳糖均为 &；beta；-半乳糖苷酶底物，但是不能诱导&；beta；-半乳糖苷酶操纵子。实验中使用IPTG以诱导&；beta；-半乳糖苷酶操纵子。在&；beta；-半乳糖苷酶作用下生成深蓝色产物