一、污染的防范
    防范是防止细胞培养过程中发生污染的方法。只有防范作业做在前，才华将发生污染的可能性降到小程度。一般防范可从以下几方面着手：

（一）从操作者做起
1、操作者责任心要强，要仔细稳重，操作技术要娴熟。进无菌室前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5分钟，按规定穿阻隔衣。进入后关好门，坐下来尽量少走动。作业开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和炙烤瓶口。事先要严峻查看器材、溶液和培养物，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随意运用，防止形成大批污染。

2、操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内翻开瓶口，并将瓶口滚动炙烤。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向反面。

3、操作时要常替换吸管，切勿一根吸管做到底。一旦发现吸管口触摸了手和其他污染物品应弃去。实验完毕及时拾掇，坚持实验室清洁规整，zui后用消毒水浸泡的纱布擦台面。

（二）从物品、用品消毒灭菌着手
细胞培养所用物品清洗、消毒要*，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌实验阴性后才华运用。操作室及剩下的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。

（三）防止细胞交叉污染
在进行多种细胞培养操作时，所用用具要严峻区别，做上符号便于区分。并按次第进行操作，防止一同进行时易发生混乱。

在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，防止把细胞带到培养液中污染其他细胞。

一切细胞一旦购置，或从别处引进，或自己建立，均应及早留种冻存，一旦发生污染可弃之复苏，从头培养。

    二、污染的*
    培养细胞一经污染，大都较难处理。假如污染细胞价值不大，宜弃之；有细胞株留存的或可购置的，可在寻找原因后*消毒操作室，复苏或从头购置细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难于从头得到，可采纳以下方法*。

（一）运用抗生素
    抗生素对杀灭细菌较有用。联合用药比单独用药效果好。防范用药比污染后再用药效果好。防范用药一般用双抗生素（青霉素100u/mL加链霉素100μg/mL），污染后*用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后效果24～48小时，再换惯例培养液。此法在污染早期可能有用。所用抗生素种类除青霉素、链霉素外，还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四环素处理，每隔2～3日换液1次，传1～2代进行治疗。近年来有报道，4-氟，2-羟基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四环素衍生物（BM-2）等三种抗生素单用或合用对杀灭支原体有用。这三种抗生素均用PBS配成250X浓缩液，-20℃保存备用，运用浓度Cip为10μg/mL，BM-1为10μg/mL，BM-2为5μg/mL。运用时先吸除污染的培养液，参加含BM-1的RPMI1640培养液，3天后再吸除培养液，参加含BM-2的RPMI1640培养液，培养4天，如此连续3个次第，直至用33258荧光染色镜检证明已*支原体后，再加正常培养液培养传代3-4次。

（二）运用支原体特异性血清
    用5%的兔支原体免疫血清（血凝效价1:320以上）可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。但此法比较费事，不如用抗生素便利、经济。

（三）加温处理

将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。所以在处理前要进行预实验，摸索能zui大极限杀死支原体又对细胞影响zui小的加热时刻。此法有时不可靠。若先用药物处理后，再以41℃加温处理效果更佳。

（四）其他方法
    除了上述去除污染的方法外，还有动物体内接种除菌法、巨噬细胞吞噬法、污染培养瓶中加溴尿嘧啶再用光照耀的方法及过滤法等，但均较费事，且效果不确定。所以一旦支原体污染，除非有特别重要价值，一般均弃之从头培养。