技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 防备细胞培育中污染的铲除
防备细胞培育中污染的铲除
发布时间:2020-08-10   点击次数:150次

一、污染的防范
    防范是防止细胞培养过程中发生污染的方法。只有防范作业做在前,才华将发生污染的可能性降到小程度。一般防范可从以下几方面着手:

(一)从操作者做起
1、操作者责任心要强,要仔细稳重,操作技术要娴熟。进无菌室前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5分钟,按规定穿阻隔衣。进入后关好门,坐下来尽量少走动。作业开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和炙烤瓶口。事先要严峻查看器材、溶液和培养物,不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内,更不能随意运用,防止形成大批污染。

2、操作者动作要轻,必须在火焰周围无菌区内翻开瓶口,并将瓶口滚动炙烤。操作时尽量不要谈话,若打喷嚏或咳嗽应转向反面。

3、操作时要常替换吸管,切勿一根吸管做到底。一旦发现吸管口触摸了手和其他污染物品应弃去。实验完毕及时拾掇,坚持实验室清洁规整,zui后用消毒水浸泡的纱布擦台面。

(二)从物品、用品消毒灭菌着手
细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌除菌要仔细,并在无菌实验阴性后才华运用。操作室及剩下的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。

(三)防止细胞交叉污染
在进行多种细胞培养操作时,所用用具要严峻区别,做上符号便于区分。并按次第进行操作,防止一同进行时易发生混乱。

在进行换液或传代操作时,注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口,防止把细胞带到培养液中污染其他细胞。

一切细胞一旦购置,或从别处引进,或自己建立,均应及早留种冻存,一旦发生污染可弃之复苏,从头培养。

    二、污染的根除
    培养细胞一经污染,大都较难处理。假如污染细胞价值不大,宜弃之;有细胞株留存的或可购置的,可在寻找原因后彻底消毒操作室,复苏或从头购置细胞,再培养。若污染细胞价值较大,又难于从头得到,可采纳以下方法根除。

(一)运用抗生素
    抗生素对杀灭细菌较有用。联合用药比单独用药效果好。防范用药比污染后再用药效果好。防范用药一般用双抗生素(青霉素100u/mL加链霉素100μg/mL),污染后根除用药需采用大于常用量5~10倍的冲洗法,于加药后效果24~48小时,再换惯例培养液。此法在污染早期可能有用。所用抗生素种类除青霉素、链霉素外,还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400~800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四环素处理,每隔2~3日换液1次,传1~2代进行治疗。近年来有报道,4-氟,2-羟基喹啉(Ciprofloxacin,Cip)、截耳素衍生物(Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四环素衍生物(BM-2)等三种抗生素单用或合用对杀灭支原体有用。这三种抗生素均用PBS配成250X浓缩液,-20℃保存备用,运用浓度Cip为10μg/mL,BM-1为10μg/mL,BM-2为5μg/mL。运用时先吸除污染的培养液,参加含BM-1的RPMI1640培养液,3天后再吸除培养液,参加含BM-2的RPMI1640培养液,培养4天,如此连续3个次第,直至用33258荧光染色镜检证明已根除支原体后,再加正常培养液培养传代3-4次。

(二)运用支原体特异性血清
    用5%的兔支原体免疫血清(血凝效价1:320以上)可去除支原体污染,因特异抗体可抑制支原体生长,故经抗血清处理后11天即转为阴性,并且5个月后仍为阴性。但此法比较费事,不如用抗生素便利、经济。

(三)加温处理

将污染的组织培养物放在41℃培养18小时,可杀死支原体,但对细胞有不良影响。所以在处理前要进行预实验,摸索能zui大极限杀死支原体又对细胞影响zui小的加热时刻。此法有时不可靠。若先用药物处理后,再以41℃加温处理效果更佳。

(四)其他方法
    除了上述去除污染的方法外,还有动物体内接种除菌法、巨噬细胞吞噬法、污染培养瓶中加溴尿嘧啶再用光照耀的方法及过滤法等,但均较费事,且效果不确定。所以一旦支原体污染,除非有特别重要价值,一般均弃之从头培养。

上海通蔚生物科技有限公司

上海通蔚生物科技有限公司

地址:上海市金山区枫泾镇环东一路65弄2号3463室

主营产品:ELISA检测试剂盒,ELISA试剂盒,酶联免疫试剂盒,人ELISA试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒,豚鼠ELISA试剂盒,兔ELISA试剂盒,羊ELISA试剂盒,牛ELISA试剂盒,鸡ELISA试剂盒,鸭ELISA试剂盒

©2019 版权所有:上海通蔚生物科技有限公司  备案号:沪ICP备14033764号-3  总访问量:629661  站点地图  技术支持:环保在线  管理登陆

QQ在线客服
联系方式

021-66980655

021-66980655

扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站