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我司分享细胞培育基防备污染的四大方法
更新时间:2020-09-09   点击次数:1400次

细胞培育基受各种霉菌、细菌和支原体污染后,一般都较难扫除或杀灭,其间以支原体更难扫除,因此从防备着眼为上。

一、抗生素除菌法:用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四环素衍生物)抑制支原体。

1.抗生素制备:均可用PBS配成250×浓缩液-20℃备用。

2.处理:取受支原体污染的细胞,吸除培育液,参加含BM-1的1640培育液培育3天后,吸除培育液,再参加含BM-2的1640培育液培育4天,如此连续三个轮回。

3.检测:用33258荧光染色镜检(每个轮回末应检测一次)。

4.培育:铲除支原体后的细胞,在不加上述抗生素的培育基液中,再传代培育3~4次。

5.镜检:如铲除不*可再进行处理至纯洁停止(一般3个轮回即能被*消除),即先用含BIP培育液培育12天后,再按上述方法处理。

二、加温除菌法

把受污染的细胞置41℃中作用5~10小时。

三、动物体内接种除菌法

把受支原体污染的肿瘤细胞接种在同种动物皮下或腹腔中,借动物免疫系统消除支原体,而肿瘤细胞却能在体内持续成长,待一定时间后,从体内取出细胞培育基再进行培育繁衍。

四、巨噬细胞吞噬法

从动物腹腔采取巨噬细胞,为扫除其它细胞成分,可先进行纯化,然后再参加被支原体污染的细胞培育液中混合培育。在培育过程中,为查看支原体是否已被消除洁净,可利用支持物培育法验证,取出支持物逐日染色、镜检调查,至支原体已被消除洁净停止。

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