实验室在进行血清抗体检测时，尤其是在疫情发生情况下，必须采取一些措施防止操作人员感染NiV。血清可以用伽马射线（6kGy）照射或者用含有0．5％tween-20和0．5％的triton-X100的PBS稀释后56~0作用30min进行病毒灭活。

（1）VNT法检测血清抗体。VNT法检测血清抗体采用引起50％细胞培养孔发生CPE的TCID5。判定法。将待测血清和标准NiV病毒液作用后再加到含有Vero细胞的96孔板中，3天后进行观察。CPE被*抑制的孔判为阳性孔。血清从1：2开始稀释进行检测。由于血清本身也会引起CPE，如果血清本身CPE干扰性太强，可以先让待测血清和标准的病毒液在37~C作用10rain，然后将此混合液和细胞在37~C作用45min，再倾去此混合液，以减轻血清本身CPE的干扰。对于质量不好的血清，或者量少的血清（如蝙蝠等动物的血清）可以从1：5开始稀释。
被检血清在10倍以上稀释时能够*抑止CPE，判定为阳性；被检血清在2-10倍之间稀释时能够*抑止CPE的，判为疑似；其他情况判为阴性。

（2）ELISA法检测血清抗体。血清中抗NiV抗体ELISA检测所用的抗原一般用NiV感染的Vero细胞制备，有些血清样品用此抗原检测背景值很高，须用正常Vero细胞裂解液作为对照抗原，检测这些血清的背景值，zui终以检测值和背景值的比值作为判定依据。国家外来动物疫病诊断中心和AAHL合作，利用大肠杆菌表达的病毒N蛋白和P蛋白也建立了抗NiV血清抗体检测技术，其步骤和AAHL与马来西亚兽医研究所合作开发的NiV间接ELISA抗体检测的步骤*相似。

①血清处理。实验人员必须穿防护服和手套，并且在将该密封板从*拿到外面在56~C加热30rain之前，消毒他们的双手和密封的板。在*里，在96孔板的孔上用含有0．5％（体积分数）triton X-100和0。5％（体积分数）tween-20的PBS按照1：5比例稀释被测血清。密封此96孔板。然后，每份灭活的血清样品取22．5PI+和用PBS稀释100倍的对照抗原进行等体积*混合，并在18-22~C作用30min。然后，每份血清样品加入405~tL封闭液（含有5％的卵清蛋白和5％的脱脂牛奶）使血清zui终稀释100倍，在18～22尼帕病毒病作用30min，在两个用NiV抗原包被的孔和在另外两个用对照抗原包被的孔中分别都加入100ul这样稀释的待测血清。

②包被抗原。用PBS稀释对照抗原和NiV抗原，要确保这两种抗原蛋白质浓度相同。抗原通常稀释到l／4000-1／1000。但对每一批抗原，都应确定其合适的稀释度。按照下面方法向NUNCMaxisorp 96孔微孔板中加入50gL对照抗原或NiV抗原：第1列、第3列、第5列、第7列、第9列、第11列的孔中加入NiV抗原，在第2列、第4列、第6列、第8列、第10列、第12列的孔中加入对照抗原，然后37℃振荡1h，也可以在4℃过夜。

③封闭ELISA板。用含有0．5％tween-20的PBS冲洗ELISA板3次，再加入含有5％脱脂奶粉的PBS，37尼帕病毒病振荡30min，封闭ELISA板。

④加被检血清。用PBST冲洗板3次，并加入100uL处理的血清。在酶标A蛋白对照孔和底物对照孔中加入含有5％卵清蛋白和5％脱脂牛奶的PBS。37℃静置1h后用PBST冲洗3次。

⑤在含有1％脱脂牛奶的PBST中稀释酶标A蛋白，稀释为原来的1／3000。仔细混匀后在每个孔（除底物对照孔）中加入100uL。在底物对照孔中加入100uL含有1％脱脂牛奶的PBST，37℃静置1h后用PBST冲洗3次。

⑥准备底物溶液。在10ml 0．05mol／L磷酸缓冲液中溶解一片四甲基联苯胺（TMB，1片lmg，Sigma公司， 目录号T 3405），并加入2uL新鲜的H202。每孔中加入100uL底物溶液，在18～22℃孵育10min，后每孔加入100uLlmol／L的硫酸，终止反应。

⑦以底物对照孔为空白对照，测定各个孔的450nm处的OD值，并计算每一份血清样品的在NiV抗原包被孔OD值（ODNiV和对照抗原包被孔中OD值（ODCON）之比（OD比）。

⑧结果判定：①OD比>2．0，并且ODNiv>0．2，判为阳性；②OD比>2．0，并且ODNiv＜0．2，判为阴性；③OD比在2．0和2．2之间的应该判为疑似；④疑似和阳性样品应该用VNT进行进一步检测。