在试验室，对试剂预备一般不太留神，一般的做法是，ELISA试剂盒在试验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而疏忽了这种做法有或许影响后边温育时刻不行的疑问，其直接的结果是对一些弱阳性标本的查看呈现假阴性。
加在孔壁上部的非包被区，易致使非特异吸附。
温育所需时刻与温度成反比，即温度越高，则所需时刻相对较短。
因而在ELISA测定中试剂的预备zui为要害的是，在试验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在运用前与室温平衡。这么做的目的，首要是为了在后边的温育反响进程中，能使反响微孔内的温度能较快地抵达所央求的高度，以满足测定央求。
现在的产品ELISA试剂盒中的洗板液均需在试验室运用时对所供应的浓缩液稀释制造，因而稀释时所用的蒸馏水或去离子水应确保质量。此外，当试剂盒以OPD为底物时，则底物溶液应在反响显色前暂时制造。
ELISA试剂盒试验办法操作规范，加血清样本及反响试剂
在现在的ELISA产品试剂盒中，血清样本的参加几乎是*的要运用微量加样器参加样本的进程。
zui为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。
运用微量加样器加样有必要留神的要害点是：加样不行太快，要避免加在孔壁上部，不行溅起和发生气泡。
加样太快，无法确保微量加样的准确性和均一性。
溅起会对邻近孔发生污染。
呈现气泡则反响液界面有区别。ELISA试剂盒的参加在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要留神滴加的角度外，滴加的速度也很首要，滴加太快，很简单呈现重复滴加或加在两孔之间的现象，这么就会在孔内的非包被区呈现非特异吸附，然后导致非特异显色。
有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，通常就是上述加样及试剂的过失所构成的温育。
温育是ELISA测定中影响测定胜败zui为要害的一个要素。
ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的反响在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原*，有必要在必定的温度条件下反响必定的时刻。
