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收到细胞后正确的操作方法
发布时间:2021-11-19   点击次数:144次

我们在收到细胞后首先应该对细胞进行细胞活化︰

检查细胞株冷冻管是否有解冻情形,若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养,或立即冷冻保存(置于–70 °C,隔夜后,移到liq N2)。

然后需对冻细胞进行解冻

1、依据细胞株数据单zhi定之基础培养基种类、血清种类和其它zhi定之成份和比例,制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之血清种类,若因实验需要,必须有所不同时,务必以缓慢比例渐次改变培养基组成,确定细胞适应后,方进行所需之实验。

2、FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清),对细胞而言差异极大,请务必依据细胞株资料单zhi定之血清种类培养之。

3、将培养基置于37 °C 水槽中回温,回温后喷以70 % 酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。取出冷冻管,立即放入37 °C 水槽中快速解冻,水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿,否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后,以70%ethanol擦拭冷冻管外部,移入无菌操作台。

4、依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取10 ml培养基加至T25 或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25或T75 flask 内之培养基,混合均匀,放入37 °C,5 % CO2培养箱培养。

5、对绝大多数细胞而言,1 % 以下之冷冻保护剂DMSO,不会对细胞之贴附或活化有不良影响,不需立刻由解冻.细胞中去除,待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。

极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞,需立即去除DMSO 者,则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中,离心300 xg (约1000 rpm),5 分钟,小心移去上清液,加入适量新鲜培养基,将细胞均匀混合后,转移至培养瓶中,再放入37 °C,5 % CO2 培养箱培养。

 

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