zui近,前列腺素E2作为脐带血移植药物,在不同器官中,前列腺素可能是细胞生长的主要调控因子,知道它可以用于脐带血移植,也能够在肝脏中起作用,那么很可能前列腺素还能影响更多的其他器官。
发现在干细胞分化形成内脏的区域中,前列腺素E2的含量存在一个梯度。当时已知药物对斑马鱼胚胎进行化学筛选,以寻找能够令造血干细胞增多的化合物。发现前列腺素E2的效果,它是*被发现有此效果的分子。肝脏和胰腺来源于共同的内胚层前体细胞。
1 细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制。DH5?菌株OD600为0.5时细胞密度是5×107/ml);
2 所有操作均应在无菌条件和冰上进行;
3 经CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加,24小时达到zui高,之后转化率再下降(这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的);
4 化合物及无机离子的影响:在Ca2 的基础上联合其他二价金属离子(如Mn2 或Co2 )、DMSO或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高(100-1000倍);
5 所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率;
6 质粒的大小及构型的影响:用于转化的应主要是超螺旋的DNA;显示在这些负责肝脏/胰腺形成的干细胞上,存在着特殊的细胞膜受体,这些受体可以检测周围的前列腺素E2含量,希望能够将其用于诱导多能干细胞iPSC,控制它们向肝细胞或者胰腺细胞分化。iPSC是将对成熟细胞进行重编程形成的,具有与干细胞类似的特性,这样的方案将能帮助治疗那些需要移植肝细胞或者相关器官受损的患者。