ELISA试剂盒操作步骤复杂，操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。
1.加样
2.温育
3.洗涤
4.显色
5.比色

1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 

2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 

3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 

4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，ELISA试剂盒避免使用带金属部分的加样器。 

5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 

6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 

7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 

8． 加入试剂的顺序应一致，ELISA试剂盒以保证所有反应板孔温育的时间一样。 

9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。