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2016年影响ELISA试剂盒检查要素
更新时间:2016-11-21   点击次数:1405次

ELISA试剂盒即酶联免疫吸附实验,是一种常用的固相酶免疫测定办法。 因为ELISA办法活络,特异性强不需要特殊设备,所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响要素较多,并且其操作中有一定的技能请求,在临床查验中除正常反响外,有时常可见到一些过错成果(即假阳性或假阴性)如标本的影响上海劲马为我们解读ELISA检查的影响要素。
标本的影响
溶血标本及混有红细胞的血清选用ELISA法检查易发生假阳性。也许是溶血血清中富含过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素),ELISA试剂盒在洗刷过程中往往难以*洗脱,它可使H2O2释放出原生态氧(O),从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质,即显蓝色,发生假阳性[2]。所以严重溶血标本禁用。
标本受细菌污染。因菌体中也许富含内源性辣根过氧化物酶,因而,被细菌污染的标本同溶血标本一样,亦可发生非特异性显色而搅扰测定成果。
ELISA试剂盒标本保留不妥。在冰箱中保留过久的标本,在间接法ELISA测定中会致使本底过深、形成假阳性;为战胜上述搅扰,ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜收集;如不能当即测定,5 d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质有些浓缩,散布不均,应充沛混合后再测定,但混匀时应轻柔,不行激烈振动。
塑料试管能吸附抗原物质,样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量降低形成假阴性。运用真空采血管;并运用非抗凝标本,肝素抗凝血浆会添加OD值,EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA体系中辣根过氧化物酶活性。
ELISA试剂盒标本凝结不全。 在工作中,有时为了争取时间快速检查,ELISA试剂盒常在血液还未开始凝结时即强行离心别离血清,使血清中仍残留有些纤维蛋白原,在ELISA测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块,易形成假阳性成果;因而血液标本收集后有必要使其充沛凝结后再别离血清。

 

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