ELISA直接法试验过程：
一、包被抗原
1) 用 PBS 或碳酸盐缓冲液稀释抗原至终浓度 20 μg/ml。用移液器汲取 50 μl 稀释抗原到 PVC 酶标板上，按要求往后进行系列稀释。
2) 酶标板上掩盖封口膜，室温孵育 2 小时，或许 4 °C 过夜。孵育时刻需求优化。
3) 倒掉孵育溶液，用 PBS 洗板 2 次，每孔 200 μl。在水池上轻甩倒掉洗液，在纸巾上轻拍酶标板除去残留液体。
二、关闭
1) 用含 5% 脱脂奶粉或含 5% 血清的 PBS 缓冲液关闭酶标板上剩下的蛋白位点，每孔 200 μl。或许用别的关闭剂如 Block ACE、BSA（牛血清蛋白）替代。
2) 封口膜掩盖酶标板室温zui少孵育 2 小时，或许 4 °C 过夜。
3) PBS 洗板 2 次。
三、加抗体孵育
1) 参加抗体，每孔 100 μl，稀释到浓度（参照厂家引荐），使用前用关闭液现配。
2) 封口膜掩盖酶标板室温孵育 2 小时，孵育时刻需求进行优化。一般 2 小时孵育即可取得满足强的信号，但如果取得的信号较弱时，可4 °C 孵育过夜取得较强信号。
3) PBS 洗板 4 次
四、检查
1) 用多通道吸液器参加底物，每孔 100 μl（或 50 μl）。
2) 显示出满足深的色彩后，加停止液（如有必要），每孔 100 μl。