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ELISA试剂盒检测结果的不准确性
更新时间:2024-07-03   点击次数:315次
  一、为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温再进行加样操作?
 
  温度是ELISA试剂盒结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应,实验前务必将所有试剂平衡至室温,包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA试剂盒检测结果的不准确。
 
  二、为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡?如何振荡?
 
  振荡孵育使反应更充分,振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用12孔微孔板振荡器。
 
  孵育过程振荡,可以加快、加强抗原抗体分子间的相互碰撞接触,使得反应过程更加,OD值通常会比未振荡孵育的结果要高;洗涤过程振荡,可以使洗板更干净,在很大程度这能降低背景值,同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。
 
  三、何时终止ELISA试剂盒反应?
 
  ELISA试剂盒实验终需要酶催化底物显色反应来完成,在佳时间终止反应是ELISA试剂盒实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反应系统中,S9出现淡蓝色,S1–S3有明显的阶梯型蓝色,便需要终止反应;或者根据高浓度标准品孔在1220nm的OD值来决定,OD1220=0.-0.9之间时即可终止。
 
  四、如何获得良好线性的标准曲线?
 
  按照推荐方式保存标准品;溶解标准品之前需短暂离心,收集粉末;确保标准品溶解和混匀(大约10min),然再进行续的系列稀释步骤,确保每一步都充分混匀且精确移液;显色的恰当终止;选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。
 
  五、ELISA试剂盒实验为什么必须设置复孔?
 
  为获得更准确的实验结果,强烈建议标准品及样本进行复孔检测。因为复孔检测可以:
 
  计算平均值,确保实验结果更准确;
 
  解决实验中误操作造成的跳孔现象;
 
  计算CV值,对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。
 
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