血清在培养基中扮演着这么多的人物,那么它在培养的进程中也会出现一些的问题,比如说:在培养进程中会出现一个个“小黑点”的现象,这是怎样一回事呢?
我们一旦发现培养基中有黑点,我们先不要着急,也不要慌张,要搞清楚这个黑点是什么?什么构成的?
首要,要肉眼查询培养基是否混浊,然后,在镜下查询培养细胞生长的状况,黑点是否游动等。如果细胞被污染,微生物则会很多繁衍,培养基就会敏捷变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下查询细胞,生长状况出色,与黑点出现前比较,没有任何改变,那么,黑点的出现或许与以下几种状况有关:
首要或许是细胞生长过老,破碎的细胞残骸;再有或许便是血清质量欠好,重复冻融的效果;然后或许是制作培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;其次或许是亦有或许是制作培养基的水质、容器不合格(可应用离心、过滤的方法去除这些黑点);或许是培养的原代细胞中出现小黑点(或许是原代组织中的杂质,屡次传代能够消除)。
那么我们怎样防止黑点生成呢?经过我们多年的从业经验,以为至少要做到以下几点:
(1)尽或许地减少血清冻融次数;
(2)培养基无需37℃水浴;
(3)培养基保持PH值7.0- 7.2;
(4)严格控制制作培养基的水质,容器定时冲刷;
(5)掌握细胞传代的机会,细胞切勿生长过老。
选择血清时要结合专业知识,尽可能选用客观性强的指标,在仪器和试剂允许的条件下,选用特异性强、ELISA试剂盒灵敏度高、准确可靠的客观指标,一定要事先规定读取数值的严格标准,只有这样才能准确地分析自己的实验结果,从而也大大提高了自己实验结果的可信度。